7月份索萊寶新推出了Tunel檢測試劑盒，主要分為綠色熒光和DAB顯色兩種方法，可有效滿足多數(shù)人的實驗需求！
01反應原理
細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。因此，Tunel成為了檢測DNA片段化（細胞凋亡）的常用方法。
Tunel檢測試劑盒（綠色熒光）可以通過一步反應將熒光素標記的dutp結合到3'-末端，使熒光素結合到DNA上，從而達到凋亡細胞的原位標記。
Tunel檢測試劑盒（DAB顯色法）可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的催化作用下，將3'-OH末端與與生物素（Biotin）-dUTP結合，然后通過親和素和生物素反應，將HRP酶標記到DNA的3'-末端，最后通過DAB顯色，進行凋亡細胞標記，在光學顯微鏡下可以直接觀察。
02產(chǎn)品優(yōu)勢
①安全性佳：工作液內(nèi)不含二甲申酸鈉等?；煞?，配方簡單安全且操作簡單；
②特異性好：不易出現(xiàn)假陽性等情況，熒光陽性信號強；
③適用性廣：適用于凋亡細胞或石蠟組織切片檢測以及流式檢測等實驗。
G4890
Tunel細胞凋亡檢測試劑盒（綠色熒光） | |
規(guī)格 | 價格 |
20T/50T | ￥1640/3280 |
G4891
Tunel細胞凋亡檢測試劑（DAB顯色法） | |
規(guī)格 | 價格 |
20T/50T | ￥1500/3000 |
Solarbio陽性信號更加明顯
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常見FAQS:
Q1: Tunel染色陽性信號弱？
可能原因
1. 組織或細胞通透不夠導致后續(xù)酶和熒光素無法進入細胞內(nèi)標記到DNA上；
2. 細胞或組織凋亡程度不夠，常規(guī)37℃反應1h達不到預期；
3. 蛋白酶K修復后洗脫不充分，導致后續(xù)熒光標記效果不佳；
4. 試劑失效或熒光素猝滅。
解決方案
1. 合理把控通透時間：對于細胞，適當延長通透時間增加通透性；對于不同組織，選擇合適的蛋白酶K修復時間，一般3-4μm石蠟切片室溫修復10min即可；
2. 調(diào)整優(yōu)化細胞凋亡誘導方案，在常規(guī)反應時間上增加至2-3h；
3. 增加修復后洗滌次數(shù)和時間，確保蛋白酶K洗脫充分；
4. 選擇保質(zhì)期新鮮的試劑盒用于實驗。
Q2: Tunel染色全陽性？
可能原因
1. 曝光時間過長導致大面積陽性信號；
2. 樣本處理方法不對，陽性對照DNase處理過度；
3. 某些組織凋亡程度高，常規(guī)37℃反應1h反應過度。
解決方案
1. 選擇合適的曝光時間；
2. 可以調(diào)整DNase的稀釋比例，增大稀釋比從而減少陽性率；
3. 選擇一個陽性對照切片，37℃反應1h觀察陽性率。
Q3: Tunel染色結果背景和非特異性熒光強？
可能原因
1. 染色操作過程中出現(xiàn)干片現(xiàn)象導致背景熒光強；
2. 漂洗次數(shù)不足，未能洗脫背景熒光著色；
3. 血細胞、肌纖維等存在自發(fā)熒光，導致非特異著色；
4. 曝光時間長；
5. 工作液混勻不充分，探針未能均勻溶解，導致非特異性熒光雜點。
解決方案
1. 染色過程中，暫停操作時，建議滴加1×PBS保持樣本濕潤，同時用免疫組化筆圈下組織，減少液體流失；
2. 增加工作液孵育后漂洗次數(shù)和時間；
3. 制備切片前對組織進行充分灌注或者采用自發(fā)熒光猝滅劑處理組織切片；
4. 提高分辨率，調(diào)節(jié)黑平衡或降低曝光時間。
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